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Annexin V-PI染色凋亡試劑盒

簡要描述:Annexin V-PI染色凋亡試劑盒是一種鈣離子依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨*PS有高度親和力,可通過細胞外側暴露的PS與凋亡早期細胞胞膜結合,將Annexin V標記熒光染料EGFP利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡。

  • 產品型號:SNK-001
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-06-28
  • 訪  問  量:1101
詳細介紹
品牌其他品牌CAS詳見說明書
分子式詳見說明書純度詳見說明書
分子量詳見說明書貨號SNK-001
供貨周期現貨應用領域生物產業(yè)

  染色凋亡試劑盒原理:

  磷脂酰絲氨*(PS)在正常細胞中只存在于細胞膜內側,而在凋亡早期,PS由細胞膜內側外翻至細胞膜外側。Annexin V-PI染色凋亡試劑盒是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與PS特異性結合。AnnexinⅤ經過FITC、EGFP或PE標記后,作為熒光探針,即可通過PS特異性結合從而特異性標記凋亡早期細胞。

  Propidium iodide(PI)是一種核酸染料,但其不能通過活細胞的完整細胞膜,只能通過凋亡晚期和死細胞的細胞膜,因此只能用來標記凋亡晚期細胞和死細胞。

  通過AnnexinⅤ與PI聯合標記,再經流式細胞儀或者熒光顯微鏡檢測,就可以確定細胞是活細胞、凋亡早期細胞還是凋亡晚期細胞或者死細胞。

  試劑盒組成

  A液(Annexin V-EGFP)、B液(PI溶液)、Binding Buffer

  染色凋亡試劑盒實驗步驟:

  1. 懸浮細胞處理:收集細胞懸液,900rpm 3min離心去除培養(yǎng)基后用PBS潤洗2次,再用Binding Buffer將細胞重懸為1x106個/ml的細胞懸液。

  貼壁細胞處理:將細胞消化下來吹散后,離心去除胰m及培養(yǎng)基后用PBS潤洗2次,再用Binding Buffer將細胞重懸為1x106個/ml的細胞懸液。

  2. 取100ul細胞懸液加入5ul A液與5ul B液,混勻后避光孵育10min。

  3. 用熒光顯微鏡或者流式細胞儀檢測結果。

  染色凋亡試劑盒注意事項:

  1. 必須使用活細胞進行檢測,不能使用破壞細胞膜完整性的試劑處理細胞。

  2. 普遍認為PI有潛在致癌風險,操作時注意戴手套操作,避免交叉污染。

  3. 孵育結束后,應盡量在1h以內檢測結果,否則結果可能出現異常。

  4. 細胞經過消化、離心、清洗后可能會出現凋亡增多的情況,因此必須注意操作盡量輕柔,離心轉速和時間盡量低,尤其是貼壁細胞不要消化時間過長導致細胞提前進入凋亡。

  5. AnnexinⅤ是Ca2+依賴性的磷脂結合蛋白,因此消化細胞時盡量不要使用含EDTA的消化液,PBS也不要含EDTA等螯合劑。

  6. 使用熒光顯微鏡檢測時,可以將貼壁細胞直接接種在玻片上,實驗時對細胞進行清洗染色后直接在玻片上觀察細胞,避免消化損失細胞導致凋亡率增加。

  使用流式細胞儀檢測細胞時,可以根據實驗需要設置陰性對照(未染色)、單染對照(Annexin V-EGFP、PI分別單染)以調整熒光補償去除光譜重疊,同時根據未處理細胞空白對照和經Annexin V、PI分別細胞染色后的單染對照的分析設定十字門的位置。


熒光顯微鏡下檢測效果




 
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